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免疫定量分析中標準品的制備要求
  • 更新日期:2023-07-21      瀏覽次數(shù):347
    • 標準品是標記免疫分析定量的依據(jù)。標準品的正確與否直接影響樣品的測定結(jié)果。如果在連續(xù)測定中,或各實驗室之間使用的標準品不一致,則可影響到實驗結(jié)果的可比性。為此,對標記免疫分析所使用的標準品應滿足如下要求。

      1、化學結(jié)構(gòu):原則上標準品應與被測物具有相同的化學結(jié)構(gòu),包括相同的立體化學結(jié)構(gòu)。但在實際工作中,用化學結(jié)構(gòu)相同的物質(zhì)作標準品是十分困難的。這是由于一方面來源有限,另一方面有些被測物本身的化學結(jié)構(gòu)還不清楚,或是有明顯的異型性。所以有時也用結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)作標準品。此時,應充分了解這些物質(zhì)與真正標準品之間的定量關系。

      2、化學純度:所有通過化學合成法制備的小分子化合物,都應是高化學純度的純品。對某些蛋白類物質(zhì),則可能由于純化的方法不同而有差異。對此,在最初建立該方法時,應與國際上公ren的標準參考品或高純度的純品進行比對。

      3、免疫純度:標記免疫分析是通過比較被測物質(zhì)與標準品的免疫活性實現(xiàn)的,故被測物質(zhì)與標準品對所用抗體的免疫活性應該一致,即兩者對所用的同一抗體有相同的親和力。因此,標準品的免疫純度比其化學純度更重要。

      4、反應介質(zhì):免疫學反應受反應介質(zhì)和溫度等條件的影響,所以理論上要求標準品和被測物應在相同的介質(zhì)中進行反應。如測定血清中某物質(zhì)的濃度,其所用的標準品也應溶解在無被測物的零值血清中;如測定尿液中某物質(zhì)的濃度,其所用的標準品也應溶解在無被測物的尿液中等。但在實際工作中這一點很難做到。因為,血清中的成分十分復雜,因而無被測物的零值血清的制備非常困難,而且個體血清中還可能存在一些干擾物質(zhì)。理想的標準品應該用與被測樣品相同的基質(zhì)(如血清),先將被測物質(zhì)去除,然后再加入已知量的被測物質(zhì)的純品。

      5、干擾物質(zhì):標準品中不能有干擾分析的物質(zhì)。在作為標準品使用前,必須對那些從機體提取到的大分子物質(zhì)活性進行測定。

      6、標準品的批量:為保證檢測的連續(xù)可比性,每批標準品應有相當大的量,以保證在較長的時間內(nèi)使用。每批標準品如保存的條件適當,在相當長的時間內(nèi)可保持其濃度和免疫活性的穩(wěn)定。這對于生產(chǎn)標記免疫分析試劑的廠家尤為重要。

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